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201、試述過氧化酶染色的原理、結(jié)果觀察和臨床意義

　　白細(xì)胞內(nèi)含有過氧化酶，過氧化酶能分解過氧化氫釋出新生態(tài)氧，使聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán)，再與亞硝基鐵氰化鈉作用生成藍(lán)黑色顆粒沉著于細(xì)胞內(nèi)。

　　結(jié)果觀察：陽性反應(yīng)呈藍(lán)色至棕藍(lán)色顆粒，定位于胞漿中，胞核呈陰性反應(yīng)。操作中血片應(yīng)新鮮，超過24廠則不宜染色，因過氧化酶易消失，另外染料不能過于陳舊，過氧化氫的濃度要適當(dāng)，最好臨用時配制。

　　過氧化酶染色用于白血病的鑒別診斷。在粒細(xì)胞系統(tǒng)中，原始粒細(xì)胞早期為陰性反應(yīng)，晚期為陽性反應(yīng)，自早幼粒細(xì)胞起為陽性反應(yīng)，隨細(xì)胞成熟反應(yīng)逐漸增強(qiáng)。幼單核細(xì)胞及成熟單核細(xì)胞過氧化酶染色為弱陽性反應(yīng)，顆粒細(xì)小，彌散分布，且常蓋在核上。淋巴細(xì)胞系無論是原始或成熟階段，過氧化酶染色都為陰性反應(yīng)。

　　202、使用顯微鏡的禁止事項是什么？

　�。�1）切忌用酒精擦拭物鏡和目鏡的透鏡。

　�。�2）切忌將物鏡浸于甲苯或酒精中（可使透鏡的粘著變松）。

　�。�3）切忌使用普通紙或棉花擦拭透鏡。

　�。�4）切忌用手指接觸物鏡。

　�。�1）切忌用甲苯擦拭文臺或載物合。

　�。�2）切忌用布或紙擦拭目鏡和物鏡內(nèi)部的透鏡（因其可使抗反光層剝脫）；只能用細(xì)畫筆擦刷。

　�。�7）切忌卸掉顯微鏡的目鏡，除非出現(xiàn)目鏡開口處滯住不動的情況。

　�。�8）在氣候濕熱的國家里，切忌把顯微鏡置于密閉的木盒內(nèi)。

　�。�9）物鏡上尚帶有浸油時，切不可將顯微鏡放在一旁不管。

　�。�10）切忌用1只手拿顯微鏡的臂，要用雙手操作；一只手托住底座，另1只手握住鏡臂。

　　203、使用顯微鏡的油浸物鏡時，須在被檢物與物鏡間滴加香柏油，其理由何在？

　　顯微鏡的分辨力的大小，物鏡是主要的，而物鏡的分辨力，則取決于光波波長和數(shù)值孔徑。

　　用干燥鏡觀察物體時，在物鏡與標(biāo)本之間不加任何液體介質(zhì)。而使用油鏡時，則須在蓋玻片與物鏡間，滴加香柏油作媒質(zhì)，以提高顯微鏡分辨率。這是因為顯微鏡的分辨本領(lǐng)是由其數(shù)值孔徑?jīng)Q定的，而后者與媒質(zhì)的折射率成正比，折射率越大，數(shù)值孔徑越大，反之亦然。由于香柏油的折射率大（1.52）、水次之（1.33）、空氣最�。�1.0），故在鏡口角相同時，油浸物鏡滴加香柏油后，其數(shù)值孔徑可由空氣的0.82，水的1.09，增加到香柏油的1.25.從而提高顯微鏡的分辨本領(lǐng)，同時也增加了像場的亮度

　　204、怎樣才能提高比色分析的靈敏度和準(zhǔn)確性？

　　除注意電壓應(yīng)穩(wěn)，光源充足、光電池是好的之外，主要掌握如下幾點：

　�。�1）選擇適當(dāng)?shù)臑V光片或波長，按各方法要求選取。

　�。�2）比色計的靈敏度，在0.2~0.6范圍之內(nèi)，過低過高都不夠準(zhǔn)確。故被測物質(zhì)顏色（濃度）應(yīng)在或調(diào)節(jié)在此范圍內(nèi)測定之。

　　（3）比色杯最好是原配的，空白時透光率應(yīng)相同，裝溶液比色時才會準(zhǔn)確。另外裝好比色標(biāo)本液的比色杯，其位置（放比色槽）每次的前后均應(yīng)一致。

　�。�4）準(zhǔn)確掌握比色時間；一般顯色反應(yīng)開始時，顏色逐漸加深，經(jīng)一定時間，顏色達(dá)最高點，當(dāng)穩(wěn)定4段時間后，開始消褪等。應(yīng)于穩(wěn)定階段對比色。

　�。�5）測定時如試劑本身有顏色或有干擾性雜質(zhì)，都應(yīng)做空白管，以減少其對結(jié)果的影響。

　　205、電動離心機(jī)容易發(fā)生故障的部位，怎樣維修？

　　電動離心機(jī)容易發(fā)生故障的部位是：①電刷長期與電動機(jī)高速旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)子的整流子接觸，容易磨損，經(jīng)常檢查和調(diào)整電刷的推進(jìn)螺針，以保持電刷與整流子的良好接觸，若電刷嚴(yán)重磨損后使與整流子脫離接觸，使電流無法通入轉(zhuǎn)子繞阻，需要換同規(guī)格的新電刷；若無新電刷，也可用廢電池上的炭棒自制，但這種炭刷含金屬成份少，故磨損較快，不耐用，只能解決短期的需要。②電刷磨損后產(chǎn)生的灰塵沾附在電動機(jī)轉(zhuǎn)子上，長期使用后，便形成1層薄導(dǎo)電層，便整流子轉(zhuǎn)子鐵芯導(dǎo)通，引起機(jī)殼帶電，所以每隔半年至一年應(yīng)將電動機(jī)上的電刷炭粉清除干凈。

　　206、解釋分子病的概念，并舉例加以說明。

　　分子病的概念：由于DNA分子的遺傳缺陷，致使蛋白分子中氨基酸殘基的變異所引起的疾病稱為分子病。例如正常人血紅蛋白β亞基的第6位氨基酸殘基是谷氨酸，而鐮刀形紅細(xì)胞性貧血患者的血紅蛋白中，谷氨酸被纈氨酸取代，僅此一個氨基酸之差，本來是水溶性的血紅蛋白，就變成溶解度降低，相互粘著，聚集成絲，導(dǎo)致紅細(xì)胞變成鐮刀狀而極易破碎，產(chǎn)生貧血。這種單個氨基酸的替代，是一個錯義突變（點突變），即編碼谷氨酸的密碼子GAA顛換成了GUA.

　　某些由于某種蛋白質(zhì)缺乏的疾病也被稱為分子病，例如葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏的蠶豆病、低密度脂蛋白受體缺乏的家族性高膽固醇血癥、磷酸核糖焦磷酸合成酶缺乏的痛風(fēng)癥和酪氨酸酶缺乏的白化病等等。

　　207、解釋DNA的變性、復(fù)性和核酸的分子雜交？

　　（1）DNA分子是由兩條頭尾倒置的脫氧多核苷酸所組成，其中一條鏈的堿基與另一條鏈堿基之間有氫鍵連接，并以A-T、G-C互補(bǔ)，整個DNA分子呈雙螺旋結(jié)構(gòu)。在加熱、堿性等條件下，鏈間氫鍵斷裂，形成兩條單鏈結(jié)構(gòu)，此種現(xiàn)象稱為DNA變性。

　�。�2）在去除變性因素后，兩條變性的堿基互補(bǔ)的單鏈DNA可以回復(fù)成雙鏈結(jié)構(gòu)，恢復(fù)原有的物理化學(xué)性質(zhì)和生物活性，這種現(xiàn)象稱為DNA復(fù)性。

　�。�3）熱變性的DNA在緩慢冷卻過程中，具有堿基序列部分互補(bǔ)的不同的DNA之間或DNA與RNA之間形成雜化雙鏈的現(xiàn)象稱為核酸分子雜交。DNA與DNA及RNA與DNA間的分子雜交在核酸研究中有十分廣泛的用途。

　　208、什么是酮體？為什么在糖尿病酮癥酸中毒時測定β—羥丁酸是首要的選擇？

　�。�1）乙酰乙酸、β—羥丁酸和丙酮三者統(tǒng)稱為酮體。酮體是脂肪酸在肝臟內(nèi)進(jìn)行β—氧化的中間產(chǎn)物。乙酰乙酸可被還原生成β—羥丁酸，部分乙酰乙酸可脫羧生成丙酮。由于酮體中乙酰乙酸和β—羥丁酸是較強(qiáng)的有機(jī)酸，在未控制的糖尿病人，脂動員過強(qiáng)，酮體生成大于肝外組織利用酮體的能力，將產(chǎn)生酮癥酸中毒。

　　（2）酮癥酸中毒時首選測定β—羥丁酸有以下優(yōu)點：

　�、�β—羥丁酸是血中酮體的主體成分（占78%），可反映血中酮體積聚的情況；

　�、谕�癥酸中毒時，β—羥丁酸水平增高遠(yuǎn)大于乙酰乙酸和丙酮，故是酮癥酸中毒更敏感的一個指標(biāo)；

　�、�β—羥丁酸在酮體中最為穩(wěn)定（4℃可穩(wěn)定4d），而丙酮和乙酰乙酸不穩(wěn)定，如測后兩項指標(biāo)但不及時，會產(chǎn)生較大的誤差；

　　④酶法測β—羥丁酸方法特異靈敏、準(zhǔn)確性高。

　　209、什么是膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)途徑？試述其簡要過程和重要生理意義？

　　（1）HDL在LCAT及APOAⅠ、APOAⅡ及LTP等的作用下，將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)化的過程，稱為膽固醇的逆向運(yùn)轉(zhuǎn)。

　�。�2）膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)包括三個過程：

　�、俑闻K新合成的HDL加入血液循環(huán)后，從肝外組織細(xì)胞獲取膽固醇；

　�、谘獫{中的卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶（LCAT，APOAⅠ是它的激活劑）將HDL攝取的游離膽固醇酯化成酯，使HDL逐步膨脹成為成熟的HDL，經(jīng)血液運(yùn)輸至肝臟。

　�、鄹渭�(xì)胞表面的HDL受體結(jié)合成熟HDL，被肝細(xì)胞攝取降解，其中的膽固醇酯可被分解轉(zhuǎn)化成膽汁酸排出體外。完成膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。

　�。�3）機(jī)體通過這種機(jī)制，將外周組織衰老細(xì)胞膜中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)回肝臟代謝并排出體外，使細(xì)胞內(nèi)膽固醇維持穩(wěn)態(tài)，限制AS的發(fā)生發(fā)展。

　　210、什么是DNA的半保留復(fù)制？并解釋DNA復(fù)制的半不連續(xù)性？

　�。�1）DNA復(fù)制最重要的特征是半保留復(fù)制。復(fù)制時，母鏈的雙鏈DNA解開成兩股單鏈，各自作為模板指導(dǎo)子代合成新的互補(bǔ)鏈。子代細(xì)胞的DNA雙鏈，其中一股單鏈從親代DNA分子中完整地接受過來，另一股單鏈則完全重新合成。由于堿基互補(bǔ)，兩個子細(xì)胞的DNA雙鏈，都和親代DNA堿基序列完全一致。這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制。

　　DNA半保留復(fù)制是1958年由M.Messelson和F.W.Stahl用15N標(biāo)記技術(shù)證實的。其后許多實驗都證實，不論原核生物還是真核生物，其DNA的復(fù)制全是半保留復(fù)制。

　�。�2）DNA復(fù)制只能按5′→3′一個方向合成新生鏈。以復(fù)制叉移動方向作標(biāo)準(zhǔn)，解開的兩股鏈中只有一股鏈可連續(xù)合成，就是領(lǐng)頭鏈，另一股鏈只能解開至相當(dāng)長度后，才開始引物延長復(fù)制，即產(chǎn)生多個崗奇片斷，并由后者連接成隨從鏈。由于崗奇片斷的合成是不連續(xù)的，故DNA的復(fù)制是半不連續(xù)的。