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　　211．何謂基因？簡述基因測序的基本原理及其在基因診斷中的應(yīng)用價(jià)值？

　�。�1）基因是指能夠?yàn)樯�物大分子（主要是蛋白質(zhì)，還有tRNA、rRNA等核酸）編碼的DNA片段�；�因不僅可以通過復(fù)制把遺傳信息傳遞給下一代，還可以使遺傳信息得到表達(dá)。不同人種之間頭發(fā)、膚色、眼睛、鼻子等有所不同，是基因差異所致。從這個(gè)意義上講，基因就是能夠表達(dá)一定基因產(chǎn)物的DNA序列。

　�。�2）DNA的序列分析即核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的測定，是現(xiàn)代分子生物學(xué)中一項(xiàng)重要技術(shù)，也是基因診斷的第一手資料。傳統(tǒng)的測序方法多采用放射性核素標(biāo)記，手工進(jìn)行DNA復(fù)制或裂解反應(yīng)、凝膠電泳分離DNA片段，放射自顯影以及人工判斷核苷酸序列等程序來測定DNA序列。這無疑是費(fèi)時(shí)的、準(zhǔn)確性較差的方法。近年來發(fā)展起來的自動(dòng)測序使DNA序列分析工作標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化、工廠化，極大地促進(jìn)了DNA結(jié)構(gòu)的研究。新型DNA自動(dòng)測序儀，采用熒光染料標(biāo)記技術(shù)及毛細(xì)管電泳方法進(jìn)行測定，配合同步激光掃描讀序，測定反應(yīng)、灌膠、進(jìn)樣、電泳、掃描檢測、數(shù)據(jù)分析全部實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)程序控制的自動(dòng)化，加快了檢測速度，大大提高了測定的精確性。

　　212、何謂反轉(zhuǎn)錄？說明它在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用價(jià)值？

　�。�1）反轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）也稱逆轉(zhuǎn)錄，是依賴RNA的DNA合成作用，也就是以RNA為模板，由dNTP聚合成DNA分子的過程。在此過程中，核酸合成與轉(zhuǎn)錄（DNA→RNA）過程遺傳信息的流動(dòng)方向相反（RNA→DNA）。故稱為反轉(zhuǎn)錄。

　　催化反轉(zhuǎn)錄過程的酶稱為反轉(zhuǎn)錄酶，它是一種以RNA為模板反轉(zhuǎn)錄生成DNA的酶，產(chǎn)物是與RNA模板（通常指mRNA或病毒RNA）互補(bǔ)的DNA.以單鏈cDNA為模板，經(jīng)聚合反應(yīng)可合成雙鏈cDNA.C是互補(bǔ)的意思，cDNA就是互補(bǔ)DNA.

　�。�2）從RNA入手，用mRNA反轉(zhuǎn)錄生成cDNA，得到相應(yīng)的雙鏈DNA，再進(jìn)行克隆，不但可獲得較完整的連續(xù)編碼順序，容易在宿主細(xì)胞中表達(dá)，而且能通過不同細(xì)胞或同一細(xì)胞的不同狀況表達(dá)mRNA的差異，篩選出有意義的關(guān)鍵基因，可深入研究發(fā)育、分化、癌變等重大生物現(xiàn)象的分子調(diào)控機(jī)理，這正是反向生物學(xué)研究優(yōu)勢所在。

　　213、血清酶測定的標(biāo)本怎樣收集、處理和保存？

　�。�1）采血：抽血不當(dāng)，如采血用的注射器接頭部位有水或急于分離血清都可引起體外溶血，使紅細(xì)胞內(nèi)的酶釋放入血清，引起血清酶活性的明顯提高。例如紅細(xì)胞中LD約為血清的100倍，若有1/100紅細(xì)胞人為破損，將使血清LD總活性升高一倍。又如紅細(xì)胞中有豐富的腺苷酸激酶（AK），若AK大量進(jìn)入血清，能使某些用連續(xù)監(jiān)測法測定CK的值假性升高。

　�。�2）大多數(shù)抗凝劑都影響血清中某些酶的活性，例如EDTA能螯合血清中的Ca2+、Mg2+、Mn2+等全屬離子，導(dǎo)致ALP、CK、5′-核苷酸酶（5′-NA）等缺少激活劑，使這些酶的測定值明顯降低。因此除非測定血凝與纖溶有關(guān)的酶活性，一般都使用血清而不用血漿。

　�。�3）酶蛋白不穩(wěn)定，易失活。例如25℃保存ACP4h，將使酶活性喪失10%，故應(yīng)強(qiáng)調(diào)及時(shí)檢測。

　�。�4）如在4℃冰箱保存，應(yīng)注意其穩(wěn)定性期限（參見有關(guān)教材）；對(duì)ALT、ALD等-25℃冷凍保存反而不如4℃下穩(wěn)定，應(yīng)引起注意。

　　214、什么是原癌基因和抑癌基因？簡述野生的P53基因的抑癌機(jī)理？

　　（1）原癌基因是指存在于正常細(xì)胞中能在體外引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化，在體內(nèi)誘發(fā)腫瘤的基因。原癌基因在胚胎期表達(dá)，對(duì)細(xì)胞的正常生長分化和凋亡起著重要的調(diào)節(jié)作用；但當(dāng)它受到某些因素活化并發(fā)生異常時(shí)，則能導(dǎo)致細(xì)胞癌變。癌基因的名稱一般用3個(gè)斜體小寫字母表示，如myc、ras、src等。

　�。�2）抑癌基因是一類抑制細(xì)胞過度生長、增殖，從而遏制腫瘤形成的基因。抑癌基因也存在于正常細(xì)胞中，與原癌基因共同調(diào)控細(xì)胞的生長分化。當(dāng)它丟失或失活后能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

　�。�3）野生的P53基因：野生型P53基因是在1989年于癌旁組織中發(fā)現(xiàn)的一種抗癌基因，它所表達(dá)的產(chǎn)物P53蛋白由393個(gè)氨基酸構(gòu)成，它在維持細(xì)胞正常生長、抑制惡性增生中起著重要作用，因而被冠以“基因衛(wèi)士”稱號(hào)。

　　215、何謂酶的催化活性濃度？酶的活性單位如何表示？

　�。�1）酶的催化活性濃度是酶含量測定的一種表示方法。它是利用酶的催化特性，通過測定被加速的反應(yīng)速度來間接的算出酶含量的高低，此法的結(jié)果不能用質(zhì)量單位，只能用反應(yīng)速度單位（μmol·min-1）來表示酶量的多少，并計(jì)算出一定體積（L）標(biāo)本中酶的含量（活性單位數(shù)）。這種表示酶濃度的確切名稱是酶的催化活性濃度，簡稱為酶活性濃度。

　�。�2）酶活性單位有：①國際單位（在特定條件下每min催化1μmol底物轉(zhuǎn)化的酶量）；②催量（katal，簡稱Kat）：它的定義是在最適條件下每s催化1mol底物轉(zhuǎn)化的酶量。Kat對(duì)血清酶活性測定而言顯得過大，故用μkatal或nkatal.兩者可換算

　　1IU=1μmol·min-1=16.67nmol·s-1=16.67nkatal

　　216.解釋連續(xù)監(jiān)測法。說明本法為什么要在線性反應(yīng)期進(jìn)行測定？

　�。�1）連續(xù)監(jiān)測法是指在適當(dāng)?shù)膬x器上，在不終止酶反應(yīng)的條件下，多點(diǎn)監(jiān)測整個(gè)酶促反應(yīng)過程中某一反應(yīng)引起的產(chǎn)物或底物隨時(shí)間變化的情況，在反應(yīng)速度恒定期間，以單位時(shí)間酶反應(yīng)初速度計(jì)算酶的活性濃度。由于本方法測定的是反應(yīng)速率，故又名“速率法”；又由于測定是在酶促反應(yīng)動(dòng)態(tài)期進(jìn)行的，故又稱“動(dòng)力學(xué)法”（也曾稱為“動(dòng)態(tài)法”）。但I(xiàn)FCC文件建議避免將本法稱為“動(dòng)態(tài)法”，而應(yīng)稱為“連續(xù)監(jiān)測法”。我國衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心亦推薦使用“連續(xù)監(jiān)測法”。

　�。�2）酶促反應(yīng)的線性反應(yīng)期是指在最佳條件下，酶促反應(yīng)速度保持恒定（零級(jí)反應(yīng)期）的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行的反應(yīng)。此時(shí)反應(yīng)產(chǎn)物的生成量與反應(yīng)時(shí)間呈正比例，單位時(shí)間內(nèi)吸光度的變化值亦與酶活性成正比例。這樣就能保證測定結(jié)果較為準(zhǔn)確可靠。

　　217．什么是心肌肌球蛋白？說明它對(duì)心肌梗死（MI）的診斷價(jià)值？

　�。�1）心肌肌球蛋白是心肌細(xì)胞的重要結(jié)構(gòu)和收縮蛋白之一，是構(gòu)成肌原纖維粗絲的主要成分，約占心肌蛋白總量的35%.在酸性pH環(huán)境下，其輕鏈（CardiacMyosinLightchain，CMLC）和重鏈分離并釋放入血。心肌損傷越嚴(yán)重，血清CMLC水平越高。因?yàn)镃MLC免疫學(xué)特異性強(qiáng)，所以CMLC的測定是迄今診斷AMI和研究心肌損傷及保護(hù)較特異的生化指標(biāo)。

　�。�2）CMLC用于AMI的診斷，具有以下特點(diǎn)：

　�、僭缙谏�高。MI發(fā)生后4-12h即可升高，與CK-MB出現(xiàn)陽性的時(shí)相類似，或先于CK-MB升高。

　�、诜逯灯诔掷m(xù)時(shí)間長：可達(dá)7-14d左右，超過LD升高持續(xù)的時(shí)間（5-6d）。而此時(shí)CK-MB和AST已降至正常。

　�、叟c梗死面積相關(guān)性良好。大面積梗死患者血清CMLC上升幅度大且峰值持續(xù)時(shí)間長。

　　④血清CMLC升降曲線或呈雙相型，即早期升高，1-2d后降至正常，然后再上升持續(xù)峰值5-9d（見持續(xù)性梗死病人）；或早期升高，峰值持續(xù)后緩慢降至正常。

　�、莶皇芄诿}再通后再灌注的影響。

　　218、解釋蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性？說明其分子機(jī)制？

　　（1）在某些物理或化學(xué)因素作用下，蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象被破壞，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)的改變和生物活性的喪失，稱為蛋白質(zhì)的變性。一般蛋白質(zhì)的變性主要發(fā)生二硫鍵和非共價(jià)鍵的破壞，但不涉及肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)的斷裂。蛋白質(zhì)變性后，其溶解度降低，粘度增加，喪失結(jié)晶能力，易被蛋白酶水解，酶活性和免疫活性喪失。

　　（2）若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，有些蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性。例如在核糖核酸酶溶液中加入尿素和β—巰基乙醇，可解除其分子中的4對(duì)二硫鍵和氫鍵，使空間構(gòu)象遭到破壞，喪失其生物活性。變性后如用透析方法除去尿素和β—巰基乙醇，并設(shè)法使巰基氧化成二硫鍵，核糖核酸酶又將恢復(fù)其原來的構(gòu)象，生物學(xué)活性也可幾乎全部恢復(fù)。但許多蛋白質(zhì)變性后，空間構(gòu)象破壞嚴(yán)重，不能復(fù)原，稱為不可逆性變性。

　　219、解釋阿爾氏小體

　　答：阿爾氏小體是1906年阿爾氏在急性白血病的胞漿中發(fā)現(xiàn)而命名的。該小體由脂類組成，當(dāng)白細(xì)胞惡性增生時(shí)，其胞內(nèi)脂類增加，同時(shí)膽固醇脂受某些因素影響而變性發(fā)生沉淀，用瑞氏染色時(shí)呈紅色或紫紅色針狀或桿狀物，偶呈粒狀或球形，大小不一，長短不等，常在原粒及早幼粒胞漿中出現(xiàn)一條或數(shù)條不等。有時(shí)亦出現(xiàn)在原單或幼單的胞漿中，但不出現(xiàn)于淋巴細(xì)胞的胞漿中。

　　220、簡述乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝原理及其應(yīng)用

　　答：乙二胺四乙酸（EDTA）因可與血中鈣離子結(jié)合成螯合物而阻止血液凝固。EDTA對(duì)紅、白細(xì)胞形態(tài)影響很小，國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)建議血細(xì)胞計(jì)數(shù)用EDTA二鉀作抗凝劑。由于EDTA影響血小板聚集，不適合于作凝血象檢查和血小板功能試驗(yàn)。