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　　 光譜分析法

　　一、紫外—可見分光光度法

　　(一)特點

　　靈敏度高，可達10-4g/ml~10-7g/ml;準確度高，相對誤差為2%~5%;儀器價格較低廉，操作簡單，易于普及;應用廣泛，許多化合物可以，同時應用計算分光光度法不經(jīng)分離而直接測定混合物中各組分的含量。

　　(二)基本原理

　　波長200～400nm范圍稱為紫外光區(qū)，400～760nm稱為可見光區(qū)。物質吸收紫外和可見光區(qū)電磁波而產(chǎn)生的吸收光譜稱為紫外-可見吸收光譜。 （醫(yī).學教育網(wǎng)搜集整理）

　　Lambert-Beer定律 A=ECL

　　A為吸收度，E為吸收系數(shù)，C為被測物質溶液濃度，L為光路長度。吸收系數(shù)E是物質的物理常數(shù)，隨濃度C單位的不同有不同表示方法。藥品檢驗中使用百分吸收系數(shù) ，物理意義是當吸光物質溶液濃度為1%(1g/100ml)，液層厚度為1cm時的吸收度。

　　(三)可見-紫外分光光度計

　　光源-單色器-吸收池-檢測器-數(shù)據(jù)記錄和處理

　　1.光源：紫外光區(qū)通常采用氫燈或氘燈，可見光區(qū)采用鎢燈。

　　2.吸收池：玻璃池適用于370nm以上的可見光區(qū)，石英池適用于紫外、可見光區(qū)，通常僅在紫外光區(qū)使用。

　　(四)紫外吸收光譜與物質結構的關系

　　紫外—可見吸收光譜屬分子吸收光譜，是由分子的外層價電子躍遷產(chǎn)生的，也稱電子光譜。它與原子光譜的窄吸收帶不同。每種電子能級的躍遷會伴隨若干振動和轉動能級的躍遷，使分子光譜呈現(xiàn)比原子光譜復雜得多的寬帶吸收。

　　當分子吸收紫外—可見區(qū)的輻射后，產(chǎn)生價電子躍遷。這種躍遷有三種形式：

　　(1)形成單鍵的σ電子躍遷。

　　(2)形成雙鍵的π電子躍遷。

　　(3)未成鍵的n電子躍遷。

　　(五)吸收度的測定方法

　　1.對溶劑的要求：能充分溶解樣品，與樣品無相互作用，揮發(fā)性小，在測定波長處的吸收要符合要求。

　　2.空白對照實驗：將配制溶液用溶劑(空白溶液)裝入?yún)⒈瘸乩�，調節(jié)儀器，使吸收度為0，去除溶劑和容器吸收、光散射。反射的影響。

　　3.測定波長確證：為提高測定方法靈敏度，減少測定誤差，吸收度一般在λmax處測定。

　　4.供試品溶液濃度：使吸收度在0.3～0.7范圍內。

　　5.儀器的狹縫寬度：以減少狹縫寬度時，供試品溶液吸收度不再增加為準。